იმისთვის, რომ შეძლოთ პიგმენტების ამოღება ქლოროპლასტები შეჩერებულია საიზოლაციო ბუფერში. ქლოროპლასტების პიგმენტების ამოღება რომ შევძლოთ, ჯერ ბუფერი უნდა მოვიშოროთ. რა არის საუკეთესო გზა ქლოროპლასტების ბუფერისგან გამოყოფისთვის? გამოიყენეთ ცენტრიფუგა
როგორ გამოყოფთ ქლოროპლასტს?
ქლოროპლასტის იზოლაციის მეთოდით, უჯრედის კედელი იშლება მექანიკურად ბლენდერის ან ჰომოგენიზატორის გამოყენებით. შემდეგ უწყვეტი ფოთლის ქსოვილი და უჯრედული ნამსხვრევები ამოღებულია ფილტრაციით. ქლოროპლასტები გროვდება ცენტრიფუგირებით პერკოლის გრადიენტის გამოყენებით.
როგორ ამზადებთ ქლოროპლასტის იზოლაციის ბუფერს?
მოამზადეთ 1X ქლოროპლასტის საიზოლაციო ბუფერის საჭირო რაოდენობა 2X ბუფერული მარაგის განზავით 1:1 dH2O წყლით დაამატეთ 10 μL 10% BSA ხსნარი 1X ქლოროპლასტის მლ-ზე იზოლაციის ბუფერი. გამოყენებამდე, დაამატეთ 1 μL DTT 1 მლ ქლოროპლასტის საიზოლაციო ბუფერზე. მონიშნეთ ეს ბუფერი, როგორც „სრული ბუფერი“.
რა არის ქლოროპლასტის იზოლაციის ბუფერში?
დნმ-ის საიზოლაციო ბუფერი შედგებოდა 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM EDTA და 1 mM DTT ქლოროპლასტის ლიზი მიღებულ იქნა ინკუბაციით. ქლოროპლასტის მარცვლები 8 მლ დნმ-ის საიზოლაციო ბუფერით, 1,5 მლ 20% SDS, 20 მკლ 2-მერკაპტოეთანოლი და 30 μl პროტეინაზა K (10 მგ/მლ) ცენტრიფუგის მილში 55°C-ზე 4 საათის განმავლობაში.
რა არის ბუფერის pH, რომელიც გამოიყენება ისპანახის ფოთლის ჰომოგენიზაციისთვის ქლოროპლასტის იზოლაციის პროტოკოლში?
ისპანახი დატვირთულია კარგი ქლოროპლასტებით და ადვილად იზოლირებულია. ფოთლები უნდა მოათავსოთ ცივ ბლენდერში 0,1 მ ფოსფატის ბუფერით, pH 7,5 და 0,5M საქაროზა, რათა არ ასკდეს.
