ბიმოლეკულური ფლუორესცენციის კომპლემენტაციის (BiFC) ანალიზი არის მეთოდი, რომელიც გამოიყენება ცილა-ცილის ურთიერთქმედების პირდაპირ ვიზუალიზაციისთვის in vivoცოცხალი უჯრედის გამოსახულების ან ფიქსირებული უჯრედების გამოყენებით. … BiFC პირველად აღწერა ჰუ და სხვებმა.
როგორ მუშაობს ბიმოლეკულური ფლუორესცენციის კომპლემენტაცია?
BiFC-ის მუშაობის პრინციპი ემყარება ფლუორესცენტური კომპლექსის განვითარებას, ფლუორესცენტური ცილის ორი სეგმენტის გაერთიანების შედეგად, როდესაც ისინი ახლოს არიან ფრაგმენტებში ცილა-ცილის ურთიერთქმედების გამო, ე.ი., BiFC-ში ფტორფორი იყოფა ამინო და კარბოქსილის ტერმინალურ ბოლოებად.
რა არის BiFC ტესტი?
ბიმოლეკულური ფლუორესცენციის კომპლემენტაციის (BiFC) ანალიზი იძლევა ცილების ურთიერთქმედების მარტივ და პირდაპირ ვიზუალიზაციას ცოცხალ უჯრედებში (45). BiFC მიდგომა ეფუძნება ფლუორესცენტური კომპლექსის ფორმირებას, როდესაც ორი ცილა, რომელიც შერწყმულია ფლუორესცენტური ცილის არაფლუორესცენტულ ფრაგმენტებთან, ურთიერთქმედებს ერთმანეთთან (ნახ.
რატომ კეთდება BiFC ტესტი?
BiFC-ის იდეაა გამოხატოს GFP-ის ნახევრები, რომლებიც შერწყმულია თქვენს ინტერესის პროტეინებთან თუ POI-ები ურთიერთქმედებენ, შეგიძლიათ ორივე ნახევარი შეაერთოთ, რომ მიიღოთ ფუნქციური GFP. ასე რომ, თუ უჯრედში გამოხატულია GFP-ის ნახევარი, არ გამიკვირდება, რომ GFP ანტისხეულს შეუძლია მისი აღმოჩენა.
არის BiFC შექცევადი?
BiFC კომპლექსების შეუქცევადობა კარგად არის დოკუმენტირებული (10), და როგორც ჩანს, უმეტესობა, თუ არა ყველა, ფლუორესცენტური ცილის - ზე დაფუძნებული BiFC სისტემები შეუქცევადია (8, 33, 43, 48–51).
