როდესაც თანმიმდევრობის საკმარისი ასლები წარმოიქმნება PCR-ით, ელექტროფორეზი გამოიყენება ფრაგმენტების ზომის მიხედვით გამოსაყოფად.
როგორ გამოიყოფა დნმ-ის ფრაგმენტები?
გელის ელექტროფორეზი არის ტექნიკა, რომელიც გამოიყენება დნმ-ის ფრაგმენტების (ან სხვა მაკრომოლეკულების, როგორიცაა რნმ და ცილები) გამოსაყოფად მათი ზომისა და მუხტის მიხედვით. … დნმ-ის ყველა მოლეკულას აქვს ერთნაირი მუხტი თითო მასაზე. ამის გამო, დნმ-ის ფრაგმენტების გელის ელექტროფორეზი გამოყოფს მათ მხოლოდ ზომის მიხედვით.
როგორ ხდება დნმ-ის ფრაგმენტების გამოყოფა და იზოლირება დნმ-ის თითის ანაბეჭდისთვის?
დნმ-ის ფრაგმენტები, რომლებიც წარმოიქმნება შეზღუდვის ენდონუკლეაზების გამოყენებით, გამოყოფილია გელის ელექტროფორეზით(i) დნმ-ის ფრაგმენტები უარყოფითად დამუხტული მოლეკულებია. ამრიგად, ისინი მოძრაობენ ანოდისკენ ელექტრული ველის ქვეშ საშუალო საშუალებით. … (iv) დნმ-ის გამოყოფილი ზოლები იჭრება და ამოღებულია გელის ნაწილიდან.
გამოყოფის რომელი მეთოდები გამოიყენება დნმ-ის იზოლირებისთვის?
ორგანული ექსტრაქცია მოიცავს მრავალ სხვადასხვა ქიმიურ ხსნარში დამატებას და ინკუბაციას; ლიზისის საფეხურის, ფენოლის ქლოროფორმის ექსტრაქციის, ეთანოლის დალექვის და სარეცხი ეტაპების ჩათვლით. ორგანული ექსტრაქცია ხშირად გამოიყენება ლაბორატორიებში, რადგან ის იაფია და იძლევა დიდი რაოდენობით სუფთა დნმ-ს.
რატომ გამოიყენება ეთიდიუმის ბრომიდი EtBr გელის ელექტროფორეზის დროს?
ეთიდიუმის ბრომიდი (EtBr) ზოგჯერ ემატება გაშვებულ ბუფერს დნმ-ის ფრაგმენტების გამოყოფის დროს აგაროზის გელის ელექტროფორეზით. იგი გამოიყენება იმიტომ, რომ მოლეკულის დნმ-თან შეკავშირებისას და ულტრაიისფერი შუქის წყაროთი განათებისას, შესაძლებელია დნმ-ის ზოლის ნიმუშის ვიზუალიზაცია.
