უჯრედების დათბობის სახელმძღვანელო
- გაყინული უჯრედები სწრაფად გალღეთ (< 1 წუთი) 37°C წყლის აბაზანაში.
- გალღობილი უჯრედები ნელ-ნელა განზავეთ მათ ინკუბაციამდე წინასწარ გახურებული ზრდის საშუალების გამოყენებით.
- აღდგენის ოპტიმიზაციისთვის დაფქული უჯრედები მაღალი სიმკვრივით.
- ყოველთვის გამოიყენეთ სწორი ასეპტიკური ტექნიკა და იმუშავეთ ლამინირებული ნაკადის გამწოვში.
რატომ ხდება უჯრედების დათბობა?
სასიცოცხლოდ მნიშვნელოვანია უჯრედების სწორად დათბობა, რათა შევინარჩუნოთ კულტურისსიცოცხლისუნარიანობა და საშუალებას მისცემს კულტურას უფრო სწრაფად აღდგეს. ზოგიერთი კრიოპროტექტორები, როგორიცაა DMSO, ტოქსიკურია 4 °C-ზე ზემოთ. აქედან გამომდინარე, აუცილებელია, რომ კულტურები სწრაფად გაიყინოს და განზავდეს კულტურულ გარემოში ტოქსიკური ეფექტის შესამცირებლად.
რა არის გალღობის პროცესი?
დათბობა არის პროცესი გაყინული პროდუქტის გაყინულიდან ტემპერატურამდე (ჩვეულებრივ 0°C-ზე ზემოთ) გადაყვანის პროცესში, სადაც არ არის ნარჩენი ყინული, ანუ "გაყინვა". დათბობა ხშირად განიხილება როგორც უბრალოდ გაყინვის პროცესის შებრუნება.
რა არის უჯრედების გაყინვის საუკეთესო საშუალება?
გაყინეთ უჯრედები ნელა, ტემპერატურის შემცირებით დაახლოებით 1°C წუთში კონტროლირებადი სიჩქარის კრიო-საყინულე ან კრიოგაყინვის კონტეინერის გამოყენებით, როგორიცაა Mr. Frosty,” ხელმისაწვდომია Thermo Scientific Nalgene labware-დან (Nalge Nunc). ყოველთვის გამოიყენეთ რეკომენდებული გაყინვის საშუალება.
როგორ დნება პირველადი უჯრედი?
გაწმინდეთ უჯრედების ფლაკონის გარე ნაწილი 70% ეთანოლით ან იზოპროპანოლით. ბიოუსაფრთხოების კაბინეტში გადაატრიალეთ თავსახური მეოთხედი შემობრუნების მიზნით შიდა წნევის შესამსუბუქებლად და შემდეგ ხელახლა დაჭიმეთ. სწრაფად გაათბეთ უჯრედები 37°C წყლის აბაზანაში ფლაკონის ნაზად მორევით.ამოიღეთ ფლაკონი, როდესაც ყინულის მცირე რაოდენობა რჩება.
