შეზღუდული მონელება მიიღწევა სამიზნე დნმ-ის მოლეკულის ინკუბაციით შეზღუდვით ფერმენტებით - ფერმენტები, რომლებიც ცნობენ და აკავშირებენ სპეციფიკურ დნმ-ის თანმიმდევრობებს და იშლებიან სპეციფიკურ ნუკლეოტიდებში, როგორც ამომცნობი თანმიმდევრობის შიგნით, ასევე მის გარეთ. ამოცნობის თანმიმდევრობით.
როგორ შეიწოვება შემაკავებელი ფერმენტები?
შეზღუდვის ფერმენტის მონელების პროტოკოლი
- დაამატეთ კომპონენტები სუფთა მილში ნაჩვენები თანმიმდევრობით: …
- რეაქციის ინკუბაცია მონელების ტემპერატურაზე (ჩვეულებრივ 37 °C) 1 საათის განმავლობაში.
- მონელების შეჩერება სითბოს ინაქტივაციით (65 °C 15 წუთის განმავლობაში) ან 10 მმ საბოლოო კონცენტრაციის EDTA დამატებით.
შლაგავს დნმ-ს შემაკავებელი ფერმენტი?
შემზღუდავი ფერმენტები ასევე შეიძლება გამოყენებულ იქნას PCR პროდუქტებზე თავსებადი ბოლოების შესაქმნელად. … ყველა შემთხვევაში, ერთი ან მეტი შემაკავებელი ფერმენტი გამოიყენება დნმ-ის მოსანელებლად, რომელიც მიღებულიათავსებად პლაზმიდში არამიმართული ან მიმართულების შეყვანისას.
როგორ მუშაობს დნმ-ის შემზღუდველი ფერმენტები?
როგორ მუშაობს შემაკავებელი ფერმენტები? ყველა ფერმენტის მსგავსად, შემაკავებელი ფერმენტი მუშაობს ფორმის ფორმასთან შეხამებით როდესაც ის შედის კონტაქტში დნმ-ის თანმიმდევრობასთან, რომელიც შეესაბამება ფერმენტის ნაწილს, რომელსაც ეწოდება ამოცნობის ადგილი, ის ეხვევა დნმ-ს და იწვევს დნმ-ის მოლეკულის ორივე ჯაჭვის რღვევას.
რა ფერმენტი შლის დნმ-ს?
ამ ფერმენტებს უწოდებენ შეზღუდვის ენდონუკლეაზებს ან რესტრიქციულ ფერმენტებს და მათ შეუძლიათ დნმ-ის მოლეკულების დაშლა იმ პოზიციებზე, სადაც არის ფუძეების კონკრეტული მოკლე თანმიმდევრობა..
