თუ თქვენი ცილა არ არის იგივე ზომის, როგორც თქვენი ანტისხეული, შეგიძლიათ გამორეცხოთ 0.1M გლიცინით, pH2-3 და შემდეგ გამოყოთ თქვენთვის საინტერესო ცილა ანტისხეულისგან SEC-ის გამოყენებით. (როგორც სუპერდექსი 200).
რა არის ცილის გამორეცხვა?
ცილები გამოირეცხება ორგანული გამხსნელის მზარდი რაოდენობისგრადიენტით, როგორიცაა აცეტონიტრილი. ცილები იხსნება მათი ჰიდროფობიურობის მიხედვით. HPLC-ით გაწმენდის შემდეგ ცილა იმყოფება ხსნარში, რომელიც შეიცავს მხოლოდ აქროლად ნაერთებს და ადვილად შეიძლება ლიოფილიზდეს.
რატომ აქვთ ცილებს დაბალი pH ელუცია?
დაბალი pH ბუფერის გამოყენება ცილიდან A გამორეცხვისთვის ცნობილია, რომ ხელს უწყობს პროდუქტის აგრეგაციას თუმცა, უფრო შეზღუდული მტკიცებულება ვარაუდობს, რომ დაბალი pH შეიძლება არ იყოს ერთადერთი პროტეინის A ქრომატოგრაფიაში აგრეგაციის მიზეზს, პირიქით, პროცესის სხვა ასპექტებმა შეიძლება მნიშვნელოვანი წვლილი შეიტანოს.
როგორ კეთდება ელუცია?
ანალიტიკურ და ორგანულ ქიმიაში ელუცია არის პროცესი მოპოვება ერთი მასალის მეორისგან გამხსნელით გარეცხვით; როგორც დატვირთული იონგაცვლის ფისების რეცხვისას დაჭერილი იონების მოსაშორებლად. … მას შემდეგ, რაც გამხსნელის მოლეკულები ანაცვლებენ ანალიზს, ანალიზის ჩატარება შესაძლებელია სვეტიდან ანალიზისთვის.
რამდენი ანტისხეული გჭირდებათ Coip-ისთვის?
ჩვეულებრივი Co-IP ექსპერიმენტებისთვის, ანტისხეული, რომელიც მე გამოვიყენე არის არაუმეტეს 2მგ (ჩემს კომპლექტში 1,4-2,0გგ ანტისხეული საკმარისია 2500-5000მგ. პროტეინის ლიზატი.) მაგრამ ეს მაინც დამოკიდებულია ნიმუშებში თქვენი სამიზნე ცილების ექსპრესიის დონეებზე, ასე რომ თქვენ ალბათ მოგიწევთ გარკვეული ცვლილებების გაკეთება.
